Un nuovo approccio al vecchio problema: Effetto filtro interno tipo I e II in fluorescenza

La tecnica della fluorescenza è molto popolare ed è stata utilizzata in molti campi di ricerca. È semplice nelle sue ipotesi ma non molto facile da usare. Uno dei problemi principali è l’effetto filtro interno (IF) I e II che avviene nella cuvetta. SE il tipo I è permanentemente presente, ma SE il tipo II si verifica solo quando gli spettri di assorbimento e fluorescenza si sovrappongono. Per evitare IF di tipo I, le assorbenze nella cuvetta dovrebbero essere inferiori a 0,05, che è tuttavia molto difficile da ottenere in molti esperimenti. In questo lavoro proponiamo un nuovo metodo per risolvere questi problemi nel caso di un fluorimetro a eclissi di Cary, con fessure orientate orizzontalmente, basato su vecchie equazioni sviluppate a metà del secolo scorso. Questo metodo può essere applicato per altri strumenti, anche questi con travi orientate verticalmente, perché condividiamo script scritti in ambiente MATLAB e GRAMS / AI. I calcoli nel nostro metodo consentono di specificare i parametri della geometria del fascio nella cuvetta, necessari per ottenere la forma corretta e l’intensità della fluorescenza degli spettri di emissione ed eccitazione. Tale specifica dipendenza dell’intensità della fluorescenza dall’assorbanza può, in molti casi, offrire la possibilità di determinare la resa quantistica (QY) utilizzando pendenze delle linee rette, che è stata dimostrata con l’uso di soluzioni di triptofano (Trp), tirosina (Tyr) e rodamina B (RhB). Ad esempio, supponendo che QY=0,14 per Tyr, il QY determinato per RhB ha raggiunto QY=0,71±0.05, sebbene la misurazione per Tyr e RhB sia stata eseguita in un intervallo spettrale completamente diverso.