Un nuevo enfoque al antiguo problema: Efecto de filtro interno tipo I y II en fluorescencia

La técnica de fluorescencia es muy popular y se ha utilizado en muchos campos de investigación. Es simple en sus supuestos, pero no muy fácil de usar. Uno de los principales problemas es el efecto de filtro interno (IF) I y II que tiene lugar en la cubeta. SI el tipo I está presente permanentemente, pero SI el tipo II ocurre solo cuando los espectros de absorción y fluorescencia se superponen. Para evitar el IF tipo I, las absorbencias en la cubeta deben ser menores de 0,05, lo que sin embargo es muy difícil de obtener en muchos experimentos. En este trabajo proponemos un nuevo método para resolver estos problemas en el caso de un fluorímetro de Eclipse de Cary, con ranuras orientadas horizontalmente, basado en antiguas ecuaciones desarrolladas a mediados del siglo pasado. Este método se puede aplicar a otros instrumentos, incluso a estos con vigas orientadas verticalmente, porque compartimos scripts escritos en MATLAB y en el entorno GRAMS/AI. Los cálculos de nuestro método permiten especificar los parámetros de geometría de haz en la cubeta, que son necesarios para obtener la forma y la intensidad de fluorescencia correctas de los espectros de emisión y excitación. Tal dependencia específica de la intensidad de fluorescencia en la absorbancia puede, en muchos casos, ofrecer posibilidades para determinar el rendimiento cuántico (QY) utilizando pendientes de las líneas rectas, lo que se demostró con el uso de soluciones de Triptófano (Trp), Tirosina (Tyr) y Rodamina B (RhB). Por ejemplo, suponiendo que QY=0,14 para Tyr, el QY determinado para RhB alcanzó QY = 0,71±0.05, aunque la medición de Tyr y RhB se realizó en un rango espectral completamente diferente.